液相色譜是打開未知物質(zhì)世界的大門。科研中的很多問(wèn)題都能在色譜圖中很好地反映出來(lái)。有些問(wèn)題可以通過(guò)改變?cè)O(shè)備參數(shù)來(lái)解決，而有些問(wèn)題必須通過(guò)操作程序來(lái)修改。畢竟，選擇合適的色譜柱和流動(dòng)相是獲得良好色譜的關(guān)鍵。

　　在液相色譜分離過(guò)程中，我們經(jīng)常會(huì)遇到六個(gè)常見的問(wèn)題。每一個(gè)問(wèn)題都可以通過(guò)使用適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)開發(fā)策略和工具來(lái)避免。

　　一、峰尾

　　峰值拖尾

　　1.屏幕被擋住了

　　如果色譜柱兩端的濾網(wǎng)堵塞，樣品會(huì)在篩板中堵塞形成延遲，樣品在柱后流出時(shí)峰形會(huì)形成尾部。可以通過(guò)反吹塔或更換篩板來(lái)解決。

　　2.折疊列

　　是指色譜柱因其他原因失去柱效，無(wú)法保留物質(zhì)，使物質(zhì)不停留在固定相上，隨流動(dòng)相流出，但仍有一點(diǎn)柱效，從而形成拖尾。可以通過(guò)重新加載或替換列來(lái)解決。

　　3.污染

　　樣本不在同一條起跑線上，從后面跑到最后，露出尾巴。更換色譜柱或用有機(jī)溶劑梯度沖洗色譜柱1小時(shí)以上即可解決。

　　4.流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤

　　如果某些樣品在一定的pH值下，分子型和離子型之間存在動(dòng)態(tài)平衡，那么離子型會(huì)逐漸向分子型呈現(xiàn)拖尾。調(diào)節(jié)pH值可以抑制分子解離，改善拖尾現(xiàn)象。對(duì)于堿性化合物，相對(duì)較低的pH值更有利于獲得對(duì)稱的峰。

　　二、高峰前

　　高峰前

　　1.樣本過(guò)載

　　保留的樣品在正常峰前持續(xù)釋放，形成前峰，從而降低樣品含量。

　　2.溶劑選擇不當(dāng)

　　當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力遠(yuǎn)強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)，會(huì)出現(xiàn)峰鋒。例如，反相色譜中使用腈作為樣品溶劑時(shí)，流動(dòng)相的洗脫能力較弱。峰鋒會(huì)出現(xiàn)。這個(gè)問(wèn)題可以通過(guò)選擇流動(dòng)相或相似比例的流動(dòng)相作為樣品溶劑來(lái)解決。

　　3.立柱損壞

　　柱效損失，無(wú)物料滯留。只能通過(guò)更換色譜柱來(lái)解決。

　　4.一個(gè)小峰出現(xiàn)在大峰之前，也就是想象中的鋒峰。即小峰埋在大峰之前，可以通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫梯度來(lái)解決。

　　第三，基線漂移

　　基線漂移

　　1.柱溫波動(dòng)

　　即使很小的溫度變化也會(huì)引起基線波動(dòng)，這通常會(huì)影響差分探測(cè)器、電導(dǎo)探測(cè)器、低靈敏度紫外探測(cè)器或其他光電探測(cè)器。可以通過(guò)使用柱溫箱和在檢測(cè)器前使用熱交換器來(lái)控制柱溫度和流動(dòng)相的溫度來(lái)解決。

　　2.不均勻流動(dòng)相

　　條件變化引起的基線漂移大于溫度引起的基線漂移。可以用HPLC級(jí)溶劑解決，流動(dòng)相使用前要脫氣。

　　3.流動(dòng)池被污染或有氣體

　　用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流動(dòng)池。如有必要，使用1N硝酸(不要使用鹽酸)。4.流量比或流量變化不當(dāng)

　　比例或流量。為避免此問(wèn)題，請(qǐng)定期檢查流動(dòng)相的成分和流速。

　　5.樣本中有強(qiáng)烈的保留意見

　　芋頭峰以逐漸增加的基線形式洗脫。這可以通過(guò)使用保護(hù)柱來(lái)解決。如有必要，在進(jìn)樣之間或分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑清洗色譜柱。

　　第四，更寬的山峰

　　更寬的山峰

　　1.由于色譜柱污染或失效，塔板數(shù)減少：更換相同類型的新色譜柱。如果新色譜柱提供對(duì)稱的峰，用強(qiáng)溶劑清洗舊色譜柱。

　　2.色譜柱與檢測(cè)器之間的管道過(guò)長(zhǎng)或管道內(nèi)徑過(guò)大：更換內(nèi)徑較小的短管道。

　　3.檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積的過(guò)度響應(yīng)可以通過(guò)縮短響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流動(dòng)池來(lái)解決。

　　五.基線噪音

　　基線噪聲

　　1.流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(尖峰):確保對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣，并沖洗系統(tǒng)以去除檢測(cè)器或泵中的空氣。

　　2.泄漏：檢查管接頭是否松動(dòng)，泵是否泄漏，是否有鹽析和異響。如有必要，更換泵密封件。

　　3.流動(dòng)相混合不充分：用手或使用低粘度溶劑充分混合。

　　4.溫度影響(柱溫過(guò)高或檢測(cè)器未加熱):使用柱溫箱降低溫差或增加換熱器。

　　5.同一線路上的其他電子設(shè)備(意外噪音):斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自外部，并進(jìn)行校正。使用精密穩(wěn)壓電源。

　　第六，決議不夠充分

　　分辨率不足

　　1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理：優(yōu)化梯度洗脫程序。

　　2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(導(dǎo)致保留時(shí)間改變):重新配置流動(dòng)相。

　　3.保護(hù)柱或分析柱堵塞：取下保護(hù)柱進(jìn)行分析，必要時(shí)更換；如果分析柱堵塞，可以進(jìn)行反沖洗；如果問(wèn)題持續(xù)存在，色譜柱可能會(huì)被強(qiáng)烈殘留的污染物損壞。再生計(jì)劃；如果問(wèn)題仍然存在，可能是入口堵塞。嘗試更換入口處的濾網(wǎng)或更換色譜柱。